| Titre : | EVALUATION DE L’ACTIVITE ANTIBACTERIENNE, ANTIFONGIQUE ET ANTITOXINOGENIQUE DE L’EXTRAIT BRUT METHANOLIQUE DES GRAINES DE Chamaerops Humilis L |
| Auteurs : | ADEM HAMID, Auteur ; ADLI DJALLAL EDDINE HOUARI, Directeur de thèse |
| Type de document : | texte imprimé |
| Editeur : | Dr. Moulay Tahar Université Saida, Faculté des Sciences Naturelles et de la Vie, 2015-2016 |
| Format : | 59 p / 29 CM |
| Accompagnement : | CD |
| Langues: | Français |
| Langues originales: | Français |
| Catégories : | |
| Mots-clés: | Chamaerops humilis L ; Extrait brut méthanolique ; Activité antifongique ; antibactérien ; antitoxinogénique .Mycotoxines |
| Résumé : |
Les plantes médicinales représentent une source inépuisable de substances et de composés naturels bioactifs dotées d’activité antimicrobienne.
Chamaerops humilis L. est une plante médicinale appartient à la famille des Acéracée, originaire des régions bordant la Méditerranée occidentale, occupe une aire de répartition très importante en Algérie, connue sous le nom de palmier nain ou palmier doum. Dans ce contexte, le but notre travail a été d’évalué l’extrait des graines de la plante selon plusieurs approches : selon une étude phytochimique antibactérien, antifongique et antitoxinogénique. , une étude du pouvoir De ce fait, les tests phytochimiques ont permis de détecter les différentes familles de composé chimique tel que les tanins, flavonoïdes, anthocyanes, comarines, stérols et triterpnes et composés réducteurs. L’extrait brut méthanolique a été obtenu par macération avec un rendement de 2,7% puis testé vis-à-vis dix souches bactériennes de références et certaines moisissures appartenant aux genres : Aspergillus, Cladosporium et Rhizopus ainsi que sur des levures du genre Candida. L’analyse du pouvoir antimicrobien vis-à-vis les dix espèces bactériennes et les trois espèces de levure (C. albicans), a montré une activité remarquable de cet extrait. De plus, l’extrait a été rendu efficace d’une part vis-à-vis la croissance des souches de moisissures testées avec des proportions variables vis-à-vis les souches de : Cladosporium spp 85,45% Rhizopus stolonifer 58,63%, Aspergillus niger 40,38% et Aspergilllus flavus 81 ,25% à une concentration de 75μg/ml L’effet de l’extrait brut méthanolique sur le poids mycélien a prouvé une inhibition considérable vis-à-vis A.flavus. Par ailleurs, les testes mycotoxicogéniques n’ont décelé aucun effet inhibiteur de l’extrait sur la sécrétion des mycotoxines (AFG et AFB) par la plaque CCM. |
| Note de contenu : |
Introduction……………………………………………………………………………….......
1 REVUE BIBLIOGRAPHIQUE I.1 Généralités sur les plantes médicinales …………………………………………………...3 I.2 Propriétés pharmacologiques ………………………………………………………………3 I.2.1. Activité antibactérienne …………………………………………………………………3 I.2.2. Activité antioxydante ...................................................................................................................3 I.3 Les éléments actifs ………………………………………………………………………...4 I.3.1 Métabolites primaires …………………………………………………………….……...4 I.3.2. Métabolites secondaires ………………………………………………………….……...4 I.3.2.1. Les composés phénoliques …………………………………………………….……...4 I.3.2.1.1 Les principales classes des composés phénoliques …………………………..……...6 I.3.2.1.1.a Acide phénolique …………………………………………………………...……...7 I.3.2.1.1.b. flavonoïdes ………………………………………………………………………...8 I.3.2.1.1.c. Les anthocyanes …………………………………………………………...……...10 I.3.2.1.1.d Coumarines ………………………………………………………………………...10 I.3.2.1.1.e. Tanins ……………………………………………………………………...……...11 I.3.2.1.1.e.1. Tanins hydrolysables …………………………………………………….……... 11 I.3.2.1.1.e.2.Tanins condensés (Proanthocyanidols) ………………………………………... 11 I.3.2.1.1.f. Lignanes …………………………………………………………………….……... 12 I.3.2.1.1.g. Quinones …………………………………………………………………...……...12 I.3.2.1.2 Effets biologiques des polyphénols …...............................................................……..13 I.3.2.2 Les alcaloïdes …………………………………………………………………..……...14 I.3.2.3 Les terpénoïdes et les stéroïdes ………………………………………………………... 14 I.3.2.4. Les huiles essentielles ………………………………………………………….……... 15I.3.2.4.1. Définition …………………………………………………………………………...15 I.3.2.4.2. Répartition et sites d’accumulation des HE dans les plantes ………………..……...15 I.3.2.4.3. Composition chimique des huiles essentielles ……………………………….……...15 I.3.2.4.3. a. Les composés aromatiques ………………………………………………...……... 15 I.3.2.4.3.b. Les composés terpéniques ………………………………………………….……... 15 I.3.2.4.3.c. Les composés d’origine diverses …………………………………………...……... 16 I.3.2.4.4. Propriétés physico-chimique des huiles essentielles ………………………………... 16 I.3.2.4.5. Les techniques d'extraction des huiles essentielles …………………………..……...16 I.3.2.4.5.a Infusion ……………………………………………………………………..……...16 I.3.2.4.5.b Macération …………………………………………………………………..……..16 I.3.2.4.5.c Décoction …………………………………………………………………………..17 I.3.2.4.5.d Distillation …………………………………………………………………..……... 17 I.3.2.4.5.d.1 Extraction par entraînement à la vapeur d’eau …………………………………..17 I.3.2.4.5.d.2 Hydro-diffusion …………………………………………………………..……...18 I.3.2.4.5.d.3 Hydro-distillation ………………………………………………………………...18 I.3.2.4.5.E.Extraction assistée par micro-onde ………………………………………………... 18 I.3.2.4.5.F Extraction par l'expression à froid ………………………………………….……...19 I.3.2.4.5.G Extraction par Ultrasons ou Sonication …………………………………... ……..19 I.3.2.4.5.H Extraction par solvants chimiques ………………………………………..…….. I.3.2.4.6. Toxicité des huiles essentielles……………………………………………….……..20 I.3.2.4.7. Analyse de la composition chimique des huiles essentielles ……………... ……...20 I.3.2.4.8 La conservation des huiles essentielles ……………………………………….……... 21 I.3.2.4.9. Les activités biologiques des huiles essentielles …………………………… ……... 21 I.3.2.4.9.a .Activités antimicrobienne …………………………………………………. ……..21 I.3.2.4.9.b. Activité antifongique ……………………………………………………… ……..21 I.3.2.4.9.c. Activités anticancéreuse …………………………………………………...……...21I.3.2.4.9.d. activité antiparasitaire ……………………………………………………...……...21 I.3.2.4.9.e .Activité anti-inflammatoire ………………………………………………...……...22 II.1 La plante étudiée (chamaerops humilis L) ………………………………………………..23 II.2 Les noms vernaculaires …………………………………………………………… ……..23 II.3 Habita ……………………………………………………………………………………... 24 II.4 Description et aspect botanique de la plante ……………………………………………..24 II.5 Classification botanique de la plante ………………………………………………26 II.6 Utilisation en médecine traditionnelle (phytothérapie) …………………………….……..26 MATERIEL ET METHODE III.1 L’objectif de travail ……………………………………………………………….……...27 III.2 Matériel végétale ………………………………………………………………….……...28 III.3 Matériel microbien………………………………………………………………...……...29 III.3.1 Les souches bactériennes………………………………………………………...……... 29 III.3.2 Les souches de moisissures ……………………………………………………..……... 30 III.3.3 Les souches de levure …………………………………………………………..……... 30 III.4 Extraction des graines de (C.h) ………………………………………………………….……... 31 III4.1 Extraction par solvant …………………………………………………………………... 31 III.5 Tests phytochimiques ……………………………………………………………..……...31 III.5.1 Préparation des extraits…………………………………………………………..……..31 III.5.1.1 Préparation de l’extrait éthanolique …………………………………………...……..31 III.5.1.2 Préparation de l’infusé aqueux………………………………………………..……...32 III.5.1.3 Préparation des extraits aqueux ……………………………………………….……... 32 III.5.1.4 Macération en milieu acide …………………………………………………………..32 III.6 Screening phytochimique ………………………………………………………...……...32 III.6.1 Les tannins ……………………………………………………………………………... 33III.6.2 Les flavonoïdes ………………………………………………………………….……..33 III.6.3 Les anthocyanes………………………………………………………………….……..33 III.6.4 Les coumarines ………………………………………………………………….……... 33 III.6.5 Les alcaloïdes …………………………………………………………………...……...33 III.6.6 Stérols et triterpénes …………………………………………………………….……...33 III.6.7 Les composés réducteurs ………………………………………………………..……... 34 III.6.8 L’amidon ……………………………………………………………………………... III.7 Etude de l’activité antibactérienne et antifongique de l’extrait des graines de (C.h) sur les souches testées …………………………………………………………………... 34 34 III.7.1 Evaluation de l’activité antibactérienne ………………………………………...34 II.71.1 Technique de détermination des concentrations minimales inhibitrices (CMI) par La méthode des micro-dilutions sur milieu liquide ………………………………...……...34 III.7.1.2 Préparation de l’inoculum …………………………………………………….……...34 III.7.1.2 a Préparation de pré culture …………………………………………………..……... 34 III.7.1.2 b Préparation de la suspension bactérienne …………………………………...……... 35 III.7.1.3Préparation de l’extrait méthanolique brut …………………………………….……... 35 III.71.4 Préparation de la solution mère ………………………………………………..……... 36 III.7.1.5 Préparation de la micro plaque………………………………………………...……... 36 II.7.1.6 Détermination de la concentration minimale bactéricide (CMB) ……………...……..37 III.7.2 Essais d'activités antifongiques …………………………………………………38 III.7.2.1 Sur les espèces de moisissures………………………………………………………..38 III.7.2.1.1 Méthode de contact direct …………………………………………………..……...38 III.7.2.2 Sur les Levures ………………………………………………………………..39 III.7.2.2.1 Détermination des concentrations minimales inhibitrices (CMI) par la méthode des micro-dilutions sur milieu liquide ………………………………………..……... 39 III.7.2.2.1.2 Préparation de l’inoculum ………………………………………………...……...39 III.7.2.2.1.3 Préparation de la solution mère …………………………………………...……...40III.7.2.2.1.4 Préparation de la microplaque …………………………………………….……... 40 III.7.2.2.1.5 Détermination de la concentration minimale fongicide (CMF) …………..……... 40 III.8 Analyses mycotoxicologiques …………………………………………………….……... 41 III.8.1 Recherche des souches productrices d’aflatoxines ……………………………...…….. III.8.2 Test d'activité antiaflatoxinogénique de l’extrait des graines de Chamaerops humilis…………………………………………………………………………………………….……... 41 41 III.8.3 Analyse chromatographique par C.C.M ………………………………………...……... 41 III.8.3.1 Extraction des mycotoxines …………………………………………………..……...41 III.8.3.2 Séparation chromatographique………………………………………………..……...43 RESULTA ET INTERPRETATION IV.1 Détermination du rendement en extrait sec ……………………………………….……... 44 IV.2 Screening phytochimiques ………………………………………………………. IV.3 Etude de l’activité antibactérienne et antifongique de l’extrait des graines de (C.h) sur les souches testées …………………………………………………………………... 44 46 IV.3.1 Activité antibactérienne ……………………………………………………………….. 46 IV.3.1.1 Détermination des concentrations minimales inhibitrices (CMI) par la méthode de micro-dilutions …………………………………………………………….……... 46IV.3.1.2 Détermination de la concentration minimale bactéricide (CMB)……………..……...47 IV.3.2 Détermination de l’Activité antifongique………………………………………..……..49 IV.3.2.1Sur les espèces de moisissures………………………………………………………...49 IV. 3.2.1.1 Méthode de contact direct…………………………………………………..……...49 IV.3.2.1 .2 L’activité inhibitrice de l’extrait à 5µg /ml ………………………………...……... 49 IV.3.2.1.3 L’activité inhibitrice de l’extrait à 12, 25 µg /ml …………………………...……... 49 IV.3.2.1.4 L’activité inhibitrice de l’extrait) à 25µg /ml………………………………. ……... 50 IV.3.2.1.5 L’activité inhibitrice de l’extrait) à 50 et 75 µg /ml………………………………... 50 IV.3.2.2 Sur les Levures ………………………………………………………………..……... 51 IV.3.2.2.1 Détermination des concentrations minimales inhibitrices (CMI) et la concentration minimale fongicide (CMF) par la méthode des micro-dilutions sur milieu liquide ………….. 51 IV.4 Résultats des analyses mycotoxicologiques……………………………………….……... 52 IV.4.1 Effet de l’extrait brut méthanolique des graines de (C.h) vis-à-vis le poids mycélien………………………………………………………………………………………. 52 IV.4.2 Test d'activité anti-aflatoxinogénique de l’extrait……………………………….……... 52 V. Discussion…………………………………………………………………………...……...53 VI. Conclusion58 X .Référence bibliographique XI Annexe |
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