| Titre : | Contribution à l’étude de l’inhibition de l’activité enzymatique relative des Métallo-Beta- Lactamases par des extraits des fruits du Phoenix dactylifera (Deglet Noor) |
| Auteurs : | berber mohamed, Auteur ; ABDOUN Laounia, Auteur ; Mokhtar HALLA, Directeur de thèse |
| Type de document : | texte imprimé |
| Editeur : | Dr. Moulay Tahar Université Saida, Faculté des Sciences Naturelles et de la Vie, 2015/2016 |
| Format : | 83 p / 29 CM |
| Accompagnement : | CD |
| Langues: | Français |
| Langues originales: | Français |
| Mots-clés: | Metallo ; bêta-lactamase ; Imipenème ; l’extrait de(Phoenix dactyliferaL ; test CDT IV |
| Résumé : |
La résistance aux carbapénèmes au sein du genre Pseudomonas, rapportée de manière
croissante dans le monde entier, est le plus souvent liée à la production de bêta- lactamases de type métallo-bêta-lactamases. Nous avons montré qu’un certain nombre d’espèces du genre Pseudomonas possèdent naturellement sur leur chromosome des gènes codant pour des carbapénèmases et en constituent donc le réservoir. Ces enzymes devenues les plus répandues et les plus significatives chez P. aeruginosa. Possèdent dans leur site actif un cation indispensable à leur activité qui est invariablement le Zinc. En outre, l’activité de ces enzymes est inhibée par l’addition de chélateur d’ions bivalents (EDTA). Ce sont des métallo-enzymes, qui ont une activité catalytique beaucoup plus forte que les autres bêta-lactamases et hydrolysent toutes les bêta-lactamines sauf l’aztréonam. La solution pour la menace ces bactéries serait de trouver des composés qui ont des propriétés chélatrices pour inhibent spécifiquement les métallo-bêta-lactamases mais de potentiel thérapeutique démontré (tolérable et non toxique sur l’organisme). nous avons, essayé dans nos travaux de rechercher un éventuel effet inhibiteur de l’activité de métallo-beta- lactamase à partir de fruits secs de Phoenix dactyliferaL. l’autre extraits semi-purifiés de bêta-lactamases, à partir d’une souche Pseudomonas aeruginosa (isolats cliniques) identifiées, par le test CDT (CombinedDisk Test Imipenème-EDTA) qui consiste en l’incubation de ces dernières en présence d’imipenème seul et d’imipenème plus EDTA. Les analyses montrent que Les rendements des extraits méthanoïque (flavonoides) faibles parrapport aux extraits (procyanidines) 23.39et48.91% respectivement. La comparaison des zones d’inhibition obtenues suite à l’application de ce test, et montre que la souche comme productrices de métallo et de sérine-bêta- lactamases par un diamètre de la zone d’inhibition (supérieur à13 mm). Les analyses quantitatives et qualitatives montrent que l’extrait semi-purifié de bêta-lactamases à partir de Pseudomonas aeruginosa est riches en protéines, et son activité enzymatique est sensible à l’EDTA, hydrolyse pénicilline; la ou les bêta-lactamases y contenues peuvent être donc du type MBL qu’est inhibé compétitivement par l’extrait de(Phoenix dactyliferaL). |
| Note de contenu : |
INTRODUCTION .................................................................................................................01
REVUE BIBLIOGRAPHIQUE I.LES METALLO-BETA-LACTAMASES............................................................................ 05 Historique......................................................................................................................06 Terminologie et définition ..................................................................................................... 07 Classification .........................................................................................................................08 Principales caractéristiques des MBLs des groupes 3a, 3b et 3c............................................09 Principales caractéristiques des MBLs des sous-classes B1, B2 et B3 ..................................09 Structure..........................................................................................................................10 Structuremoléculaire commune............................................................................................. 10 I.5. Mécanismed’action............................................................................................................... 15 I.6 Epidémiologie......................................................................................................................... 17 II. LESINHIBETEURSDE METALLO-BETA-LACTAMASES II -2 -Inhibiteurs de Dicarboxylate .............................................................................................19 II -3- Inhibiteurs de cétone et d'alcool de Trifluoromethyl .................................................... 23 II -4- Inhibiteurs de sulfonamide ...............................................................................................25 III. Plante étudiée :Phoenyxdactylifera Présentation de la plante ..........................................................................................................28 Position systématique ..............................................................................................................29 Composition biochimique........................................................................................................ 30 III.3. 1 Composition biochimique de la partie comestible "Pulpe ............................................ 30 III.3.1.1. Constituants majeurs.................................................................................................... 30 III 3.1.2. Constituants mineurs.................................................................................................... 36 III.2 Composition biochimique de la partie non comestible "Noyau " .................................... 38 MATERIEL ET METHODES I. Matériel végétale ................................................................................................................41 I.1.1.Choix de la variété......................................................................................................... 41 I.2 Matériel biologique ..........................................................................................................41 I.2.Souches étudiées ...............................................................................................................42 II. Méthodes............................................................................................................................42 IXPréparation des extraits de dattes....................................................................................... 42 II.1.1 traitement des échantillons......................................................................................... 42 Récolte et séchage.............................................................................................................. 42 Extraction de flavonoïdes glycosides ............................................................................ 43 Extraction des procyanidines ...........................................................................................43 Isolement et identification des Pseudomonas ....................................................................45 Prélèvements........................................................................................................................45 Identification........................................................................................................................45 Les caractères culturaux (Examen macroscopique)........................................................ 45 .Observation de la fluorescente sous UV......................................................................... 47 L’examen microscopique .................................................................................................. 47 Observation à l’état frais..................................................................................................... 47 Coloration de gram ............................................................................................................ 47 Test de confirmatif.............................................................................................................. 48 Test biochimiques..............................................................................................................48 Oxydase ............................................................................................................................. 48 Catalase...............................................................................................................................49 Mannitol mobilité .............................................................................................................. 49 Citrate de Simmons........................................................................................................... 50 Le milieu TSI......................................................................................................................51 Dégradation des sucres ..................................................................................................... 51 Le milieu Urée – Indole.....................................................................................................52 Recherche de sécrétrice de métallo-beta-lactamases par le test CDT......................... 52 Extration semi-purifié de beta-lactamases .......................................................................53 Analyses quantitatives ........................................................................................................ 54 Analyse quantitative des protéines dans les extraits semi-purifiés de beta-lactamases54 RESULTATS ET DISCUSSIONS....................................................................................... 55 1 .Caractéristiques de la matière première (Deglet-Nour) ...................................................56 1.1 Caractéristiques morphologiques de la datte ................................................................56 2. Obtention et caractérisation des extraits de datte fraiche.................................................56 Couleurs et aspects des extraits ...........................................................................................56 2. 2.Rendement ........................................................................................................................56 3. Résultats d’analyses microbiologiques............................................................................. 58 Identification phénotypique ............................................................................................... 58 4. Détection phénotypique de métallo-bêta-lactamases par le test CDT ............................ 61 5. Extraits semi-purifiés de bêta-lactamases........................................................................ 61 6. Analyse quantitative des protéines ....................................................................................61 7. Essais d’inhibition de l’activité enzymatique par flavonoïdes de commerce et deux extraits de fruits secsdePhoenyxdactylifera........................................................................................ 62 Conclusion ..............................................................................................................................64 Références bibliographiques................................................................................................ 67 Annexes .................................................................................................................................. 75 |
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