| Titre : | Contribution à l’étude de l’inhibition de l’activité enzymatique relative des Métallo-Bêta- Lactamases par des extraits des feuilles d’Olea europaea chez Pseudomonas aeruginosa |
| Auteurs : | MEHALHAL Abd elsamed, Auteur ; BOUMEDIENE Hamza, Auteur ; HALLA Noureddine, Directeur de thèse |
| Type de document : | texte imprimé |
| Editeur : | Dr. Moulay Tahar Université Saida, Faculté des Sciences Naturelles et de la Vie, 2015-2016 |
| Format : | 69 p. / 29 CM |
| Accompagnement : | CD |
| Langues: | Français |
| Langues originales: | Français |
| Catégories : | |
| Mots-clés: | Metallo ; bêta ; lactamase ; Imipenème ; l’extrait des feuilles d'olivier ; Pseudomonas aeruginosa |
| Résumé : |
La résistance aux carbapénèmes au sein du genre Pseudomonas, rapportée de manière
croissante dans le monde entier, est le plus souvent liée à la production de bêta- lactamases de type métallo-bêta-lactamases. Les études montrent qu’un certain nombre d’espèces du genre Pseudomonas possèdent naturellement sur leur chromosome des gènes codant pour des carbapénèmases et en constituent donc le réservoir. Ces enzymes devenues les plus répandues et les plus significatives chez P. aeruginosa. Elles possèdent dans leur site actif un cation indispensable à leur activité qui est invariablement le Zinc. En outre, l’activité de ces enzymes est inhibée par l’addition de chélateur d’ions bivalents (EDTA). Ce sont des métallo-enzymes, qui ont une activité catalytique beaucoup plus forte que les autres bêta-lactamases et hydrolysent toutes les bêta-lactamines sauf l’aztréonam. La solution pour la menace ces bactéries serait de trouver des composés qui ont des propriétés chélatrices pour inhibent spécifiquement les métallo-bêta-lactamases avec un potentiel thérapeutique démontré (tolérable et non toxique sur l’organisme). Nous avons, essayé dans nos travaux de rechercher un éventuel effet inhibiteur de l’activité de métallo-bêta- lactamase à partir deux extraits sont préparés : l’un à partir des feuilles d'olivier (Olea europaea) à l'aide de d'éthanol à 80% pendant 3 h, et l'extraction a été répétée trois fois, on récupère l’extrait par une évaporation sous vide du solvant organique et l’autre extraits semi-purifiés de bêta-lactamases, à partir d’une souche Pseudomonas aeruginosa (isolats cliniques) identifiées, par le test CDT (Combined Disk Test Imipenème-EDTA) qui consiste en l’incubation de ces dernières en présence d’imipenème seul et d’imipenème plus EDTA. La comparaison des zones d’inhibition obtenues suite à l’application de ce test, et montre que la souche comme productrices de métallo et de sérine-bêta-lactamases par un diamètre de la zone d’inhibition (supérieur à13 mm). Les analyses quantitatives et qualitatives montrent que l’extrait semi-purifié de bêta-lactamases à partir de Pseudomonas aeruginosa est riches en protéines, et son activité enzymatique est sensible à l’EDTA, hydrolyse pénicilline; la ou les bêta-lactamases y contenues peuvent être donc du type MBL qu’est inhibé compétitivement par l’extrait des feuilles d'olivier (Olea europaea). |
| Note de contenu : |
INTRODUCTION……………………………………………………………………………01
Revue bibliographique Chapitre 1 Résistance aux bêta-lactamines…………………………………………..........05 1. Les bêta-lactamines :………………………………………………………………...06 1.1.Définition : .................................................................................................................06 1.2.Mode d’action des bêta-lactamines : ..........................................................................06 2. Production de bêta-lactamases:……………………………………………………..07 2.1.Définition des bêta-lactamases: ..................................................................................07 2.2.Classification : ............................................................................................................07 2.2.1. Classification structurale (classification d’Ambler) : .........................................08 2.2.1.1. Les serine-bêta-lactamases : ........................................................................08 2.2.1.1.1. Les bêta-lactamases de classe A: ..............................................................08 2.2.1.1.2. Les bêta-lactamases de classe C: ..............................................................08 2.2.1.1.3. Les bêta-lactamases de classe D: ..............................................................09 2.2.1.1.4. Structure : ..................................................................................................09 2.2.1.1.5. Mécanisme d'action: .................................................................................12 2.2.1.1.6. Inhibiteurs : ...............................................................................................13 2.2.1.2. Les metallo-bêta-lactamases : ......................................................................13 2.2.1.2.1. Les bêta-lactamases de classe B: ..............................................................13 2.2.2. Classification fonctionnelle (Bush, Jacoby et Medeiros, 1995) : .......................13 Chapitre 2. Pseudomonas aeruginosa & Les métallo-bêta-lactamases…………………...….14 Pseudomonas aeruginosa……………………………………………………….……..15 1 1.1Taxonomie, classification...........................................................................................15 1.2Habitat ........................................................................................................................15 1.3Caractères bactériologiques........................................................................................16 VIIIMécanisme de résistance aux ß-lactamines chez de P. aeruginosa……………………17 2 2.1Résistance par production de β-lactamases de classe B .............................................17 2.2Classification ..............................................................................................................18 2.2.1 Sous-classe B1: .......................................................................................................18 2.2.1.1 Les MBLs de type IMP ...................................................................................18 2.2.1.2 Les MBLs de type VIM ..................................................................................18 2.2.1.3 Les MBLs de type SPM ..................................................................................19 2.2.1.4 Les MBLs de type GIM ..................................................................................19 2.2.1.5 Les MBLs de type FIM-1 ................................................................................19 2.2.2 Sous-classe B2: .......................................................................................................19 2.2.3 Sous-classe B3: .......................................................................................................19 2.3Les profils d'activité ...................................................................................................20 2.4Structure .....................................................................................................................20 2.4.1 Structure moléculaire commune .............................................................................20 2.4.2 Différence de structure ...........................................................................................22 2.4.3 Structure du site actif ..............................................................................................23 2.5 Mécanisme d’action ...................................................................................................25 2.5.1 Cas du site actif mono-nucléaire : ..........................................................................26 2.5.2 Cas du site actif bi-nucléaire : ................................................................................27 2.6 Inhibiteurs...................................................................................................................28 Chapitre 3 Plante étudiée……………………………………………………………..…….30 L’olivier…………………………………………………………………………….....31 1. 1.2.Classe botanique.........................................................................................................31 2.2.Distribution géographique ..........................................................................................31 Les feuilles d’olivier…………………………………………………………………..32 2. 2.2. Composition des feuilles d’olivier .............................................................................32 Les composés phénoliques des feuilles d’olivier……………………………………..34 3. 3.1.Définition et localisation des composés phénoliques .................................................34 3.2.Classification des composés phénoliques ..................................................................35 IX3.3.Activités biologiques des composés phénoliques ......................................................35 3.4.Composition des feuilles d’olivier en composés phénoliques ...................................37 3.5.Intérêts des feuilles d’olivier pour la santé humaine ..................................................38 L’oleuropéine 39 4. 4.1. Action antimicrobienne ..............................................................................................40 Partie expérimentation…………………………………………………………………...…41 Matériel et methode……………………………………………………………………...….42 1. Matériels………………………………………………………………………..……43 1.1.Matériel végétal ..........................................................................................................43 1.2.Souche étudiées………………………………………………………………..……43 2. Méthodes……………………………………………………………………………..43 2.1.Préparation de l’extrait ...............................................................................................43 2.2.Préparation d'extrait d'éthanol de 80% et les fractions...............................................43 3. 4. Prélèvement, isolement, et identification……………………………………………..44 3.1.Prélèvement ................................................................................................................44 3.2.Isolement et purification.............................................................................................44 3.3.Identification ..............................................................................................................45 3.3.1.Productions des pigments ...................................................................................45 3.3.2.Examen microscopique .......................................................................................45 3.3.3.Test biochimiques ...............................................................................................46 Recherche des souches sécrétrice metallo-bêta-lactamases…………………………...49 Test à l’EDTA .......................................................................................................................49 5.Extrait semi-purifié de bêta-lactamases……………………………………………….50 6.Analyse quantitative des protéines dans les extraits semi-purifiés de bêta-lactamases.51 7. Test d’inhibition des metallo-bêta-lactamase par l’extrait des feuillets d’Olea europaea……………………………………………………………………………………….51 Résultat et Discussion 1.Resultats des tests biochimique………………………………………………..……..54 2.Test à l’EDTA……………………………………………………………………..….56 3.Extraits semi-purifiés de bêta-lactamases……………………………………………..57 3.1.Analyse quantitative des protéines ..................................................................................56 4.inhibition des metallo-bêta-lactamase par l’extrait des feuillets d’Olea europaea………….58 XConclusion & Perspectives……………………………………………………………….…..60 Référencesbibliographiques……………………………………………………………….….61 Annexes………………………………………………………………..……………………...69 |
Exemplaires
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