| Titre : | Recherche des souches d’actinomycètes productrices des enzymes Melle bouzouira pectinolytiques à partir des sols aride de la wilaya d'Al Bayadh |
| Auteurs : | Bensefia Kharfiya, Auteur ; Bensefia Kharfiya, Auteur ; Mokhtar Benreguieg, Directeur de thèse |
| Type de document : | texte imprimé |
| Editeur : | Dr. Moulay Tahar Université Saida, Faculté des Sciences Naturelles et de la Vie, 2014-2015 |
| Format : | 51 p / 29 CM |
| Accompagnement : | CD |
| Langues: | Français |
| Langues originales: | Français |
| Index. décimale : | biotechnologie végétale |
| Catégories : | |
| Mots-clés: | Actinomycètes ; activité pectinolytique ; extraction enzymatique ; CCM. |
| Résumé : |
Les actinomycètes sont des bactéries responsables de la production de la plupart des
molécules bioactives. Dans ce travail, nous sommes intéressés à la recherche des souches productrices d’enzymes dans les sols des zones arides. Dans la première partie de ce travail, un isolement sélectif des actinomycètes à partir des sols de la région d’Al Bayadh a été réalisé. Les résultats montrent que le traitement des échantillons de sol par le Ca Co3, habituellement effectué dans les autres sols, favorise la croissance de ces microorganismes par rapport à d’autres germes envahissants. Dans la deuxième partie, 21 souches actinomycétales ont été testées pour leurs activités enzymatiques. Deux isolats ont présenté une activité pectinolytique. Après extraction enzymatique, l’activité polygalacturonase et lyase a été déterminé par la méthode à l’acide thio-barbiturique (TBA) basée sur la mesure de l’absorbance par spectrophotomètre. Les résultats montrent que les souches A1 et A7 secrètes dans le milieu liquide une pectate lyase. La nature des produits de dépolymérisation a été découvert par la technique de chromatographie sur couche mince CCM qu’a montré que les deux souches créer une seule tâche dont la distance de migration est la même. |
| Note de contenu : |
Introduction…......................................................................................................................01
Synthèse bibliographique Les actinomycètes I.1. Définition ….................................................................................................................03 I.2Historique .................................................................................................................…...04 I.3. Caractéristique des actinomycètes .....................................................................…......04 I.3.1. Morphologie …..........................................................................................................04 I.3.2. Physiologie…..............................................................................................................05 I.3.3. Caractères chimiques ................................................................................................05 I.3.3.1. La paroi cellulaire ...................................................................................................05 I.3.3.2. La structure de l’ADN .....................................................................................…....05 I.4. Ecologie et distribution des Actinomycètes...................................................................06 I.4.1. Sols ………………………………………………………………………...........….06 I.4.2. Eaux douces et marines .....................................................................................….....07 I.4.3. Air …..........................................................................................................................07 I.4.4. Thermophile ………………………………………………………………………...07 I.4.5. Actinomycètes pathogènes ….....................................................................................07 I.5. Classification des Actinomycètes ….............................................................................08I.5.1. Mycobacteriacées …..................................................................................................08 I.5.2. Actinomycétacées (ou Pro-Actinomycètes)…............................................................08 I.5.3. Streptomycétacées…...................................................................................................08 I.5.4. Actinoplanacées ….....................................................................................................09 I.6. Biologie du développement ….....................................................................................09 I.6.1.Mycélium du substrat et Mycélium aérien ….............................................................10 I.6.2. Formation des spores…..............................................................................................11 I.6.3.La germination des spores …......................................................................................12 I.6.4.Structures particulières …............................................................................................12 I.6.5.Détermination des genres …........................................................................................13 I.7.Le matériel génétique ….................................................................................................13 I.7.1.ADN chromosomique ................................................................................................13 I.7.2.ADN plasmique et ADN phagique ...........................................................................14 Métabolisme secondaire II.1. Vue générale du métabolisme......................................................................................15 II.1.1 .métabolisme primaire ...............................................................................................15 II.1.2. métabolisme secondaire.............................................................................…............15 II.2.Importance dans le domaine industriel .........................................................................17 II.2.1. Importance en biotechnologie ...................................................................................17 II.2.1.1. La production des antibiotiques .............................................................................18 II.2.1.2.La production des enzymes ...................................................................................18 II.2.1.2.1. Les cellulases ......................................................................................................18 II.2.1.2.2. Les ligninases ......................................................................................................19 II.2.1.2.3. Les pectinases .....................................................................................................19 II.2.1.2.4. Les xylanases ......................................................................................................19 II.2.1.2.5. Les amylases .......................................................................................................19 II.2.1.2.6. Les dextrinases ....................................................................................................20 II.2.1.2.7. Les chitinases .....................................................................................................20 II.2.1.2.8. Les lipases ...........................................................................................................20 II.2.1.2.9. Les protéases .......................................................................................................20II.3. Autre importance .........................................................................................................21 II.4. Importance dans le domaine agronomique ..................................................................21 II.4.1. Rôle des actinomycètes dans la biodégradation de la matière organique .................21 II.4.1.1. La notion de biodégradation ..................................................................................21 II.4.1.2. Le processus impliqué dans la biodégradation des polymères organiques.............22 II.4.1.2.1. La fragmentation .................................................................................................22 II.4.1.2.2. L'assimilation ......................................................................................................22 II.4.1.3. La biodégradation des polymères naturels ............................................................23 II.4.1.4 La biodégradation des polymères de synthèse ........................................................24 Partie expérimentale III. MATERIEL ET METHODES III. 1. Objectif …..................................................................................................................27 III.2.Isolement des souches d’Actinomycètes ….................................................................28 III.2.1Prélèvement des échantillons de sol….......................................................................28 III.2.2. Mesure du pH des échantillons…............................................................................28 III.2.3.Traitement….............................................................................................................28 III.2.4.Préparation de la suspension mère des dilutions…...................................................29 III.3.Isolement, purification et conservation des actinomycètes .........................................29 III.4.Etude phénotypique ….................................................................................................29 III.4.1.Etude morphologique ……………………………………………………...............30 III.4.1.1.les caractères culturaux et morphologiques ……………………………….........30 III.4.1.2.Etude macromorphologique…...............................................................................30 III.4.1.2.1. Observation au faible Grossissement …............................................................30 III.4.1.2.2.Observation au fort grossissement ........................................................….........30 III.4.2.Etude physiologique et biochimique …....................................................................31 III.4.2.1.Hydrolyse de l’amidon ….....................................................................................31 III.4.2.2.Hydrolyse de la gélatine….....................................................................................31 III.4.2.3. Utilisation des différents substrats carbonés et Production de l’H2S ……...........31 III.4.2.4. Utilisation du citrate comme source de carbone …..............................................32III.4.2.5.La recherche de catalase …....................................................................................32 III.4.2.6.La recherche de l’Uréase …...................................................................................32 III.4.2.7.Recherche de la production d’indole…..................................................................33 III.5.Recherche de l’activité pectinolytique des souches isolée ..........................................33 III.5.Fermentation submergée de pectinase..........................................................................33 III.5.2.Détermination des activités polygalacturonase et lyase par la méthode à l’acide thiobarbiturique (TBA). ......................................................................................................33 III.6.Détection des produits de dépolymérisation par CCM ...............................................34 Résultat et Discussion IV. Isolement des souches d’actinomycètes …....................................................................35 IV.1. Caractéristiques des échantillons…...........................................................................35 IV.2. Isolement des Actinomycètes ….................................................................................35 IV.3. caractéristiques macroscopiques des isolats …...........................................................36 IV.4. Identification des souches d’actinomycètes actives …..............................................37 IV.4.1 Résultat de l’étude morphologique….......................................................................37 IV.4.2.Etude physiologique et biochimique …....................................................................38 IV.4.3.Résultat d’hydrolyse de l’amidon.............................................................................39 III.4.4. Résultat de coloration de gram….............................................................................39 IV.4.5.Résultat d’utilisation les différentes sources de carbone étudiées ...........................40 IV.5. Recherche de l’activité pectinolytique des souches isolées .......................................40 IV.6.Recherche des activités polygalacturonase et lyase par la méthode à l’acide thiobarbiturique (TBA) ........................................................................................................42 IV.7.Détection des produits de dépolymérisation par CCM ...............................................43 V. Discussion ..................................................................................................................45 IV.CONCLUSION ............................................................................................................50 Référence Annexes |
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