| Titre : | Contribution a la production.l'extration et la caracterisation partielle des metabolites secondaires a effet antibacterien produits par des actinomycetes |
| Auteurs : | Mohamed Mahmoud Abdou, Auteur ; Mohamed Mahmoud Abdou, Autre ; Mokhtar Benreguieg, Directeur de thèse |
| Type de document : | texte imprimé |
| Editeur : | Dr. Moulay Tahar Université Saida, Faculté des Sciences Naturelles et de la Vie, 2015-2016 |
| Format : | 67.p / 29cm |
| Accompagnement : | CD |
| Langues: | Français |
| Langues originales: | Français |
| Catégories : | |
| Mots-clés: | Actinomycètes ; Streptomyces ; Antibacterial ; Fermentation ; MIC ; TLC |
| Résumé : |
Notre travail a pour but la mise en évidence de la production de molécules
antibactériennes par des isolats d’Actinomycètes isolées à partir des écosystèmes extrêmes d’El Bayadh (Ouest Algerien). Parmi six isolats qui ont subi un screening pour leur pouvoir inhibiteur, deux seulement (A4 et A18) sont sélectionnés pour leur remarquable activité antibactérienne. Les tests d’antagonismes sont réalisés envers 4 bactéries connues par leur importance dans les pathologies infectieuses humaines dont deux sont à coloration de Gram négative (Escherichia coli ATCC 25922 et Pseudomonas aeruginosaATCC 27853) et deux autres à coloration de Gram positive (Staphylococcus aureus ATCC 25923 et Listeria monocytogenes ATCC 15313). La technique des cylindres d’Agar s’avère la plus performante et le milieu de culture ISP2 est le meilleur milieu de production. La mise en fermentation sur milieu solide et en milieu liquide a permis de constater que le premier type de production de métabolite est plus rentable quantitativement et qualitativement. Le résultat de calcul de la CMI vis-à-vis de S.aureus montre que l’extrait A18 est actif à faible dose (6,25 mg/ml). Les résultats de tests physiologiques et biochimiques peuvent rapprocher l’isolat A18 du genre Streptomyces connu comme agent prometteur de production de molécules bioactives (antibactériennes). Selon les résultats de CCM l’isolat A4 produits 4 types de molécules à polarité différentes. |
| Note de contenu : |
INTRODUCTION ……………………………………………………………………
…1 SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE I. LES ACTINOMYCETES I. I. I. I.1 Définition des Actinomycètes………………………………………….......2 2. Caractéristique des actinomycètes ……………….…………………….3 2.1 Morphologie ……………………………………………….......................3 2.2 Physiologie……………………………………….………………………5 I.2.2.1 Le taux d’humidité …………………………………….………………5 I.2.2.2 La température ……………………………………...…………………5 I.2.2.3 Le pH …………………………………………………………………..5 I.2.2.4 Rapport en oxygène ………………………………..…………………6 I.2.3 Caractères chimiques ………………………………………..................6 I.2.3.1 La paroi cellulaire …………………………………..…………………6 I.2.3.2 La structure de l’ADN.…………………………………..…................6 I.2.4 Ecologie.……………………………………………..………..................7 I.3. Taxonomie des Actinomycètes…………………………………………..9 I.3.1 Taxonomie phénétique ………………………………………………….10 I.3.2 Chimiotaxonomie ………………………………………………………10 I.3.2.1 La classe "Actinobacteria" ……………………………………………12 I.4. Mode de reproduction : cycle biologique ..……………………..…….14 I.4.1 Germination des spores ………………………………………………...15 I.4.1.1 Mycélium primaire …………………………………………………...16 I.4.1.2 Mycélium secondaire …………………………….………………......16 I.4.2 Formation des spores..…………………….…………………….….......16 I.4.2.1 Les endospores …………………………………………….................16 I.4.2.2 Les exospores ………………………….……………………………..16I.5. Le matériel génétique …………………………….………………...18 I.5.1 ADN chromosomique …………….……………………………….......18 I.5.2 ADN plasmique et ADN phagique …………………………….………19 I.6. Les Actinomycète en tant que microorganismes utiles ………………19 I.6.1 Importance dans le domaine industriel …………………………….....19 I.6.2 Importance dans le domaine agronomique …………………………...20 II.LE METABOLISME DES ACTINOMYCETES II.1. Le métabolisme primaire………………………………………............21 II.2. Le métabolisme secondaire …………..…………………….……….....21 II.2.1 Les enzymes …………………………………………………………...22 II.2.2 Les antifongiques …………….………………………………………...23 II.2.3 Les antibiotiques ………………….…………………………………....23 II.2.3.1 Généralité …………………………………………………………….23 II.2.3.2 Classification des antibiotiques …………………………...…….......24 II.2.3.3 Les mécanismes envisageables pour mener une action antibactérienne ……………………………………………………………..26 II.2.3.3.1Perturbation du métabolisme cellulaire (antimétabolites) …………....26 II.2.3.3.2 Inhibition de la synthèse de la paroi des cellules bactériennes………………………………………………………………...27 II.2.3.3.3 Interaction avec la membrane plasmique ……………...……........27 II.2.3.3.4 Inhibition de la transcription et de la réplication de l’ADN………27 II.2.3.4 Résistances bactériennes aux antibiotiques ………………………….29 II.2.3.4.1 Origine du phénotype de résistance aux antibiotiques chez les bactéries ……………………………………………………………………29 II. 2.3.4.1.1 Acquisition d’une résistance vis-à-vis de certains médicaments à la suite d’une mutation ………………………… …………………………....30 II. 2.3.4.1.2 Acquisition d’une résistance vis-à-vis de certains médicaments à la suite d’un transfert de gène de résistance entres bactéries…………..…… 30 II. 2.3.4.1.3 Mécanismes de résistance aux antibiotiques chez les bactéries ……………………………………………………….……………………....30 II. 2.3.5 Facteurs favorisant l’apparition des phénotypes de résistance chez les bactéries ………………………………………….………………………….31II. Mode de transfert de la résistance aux antibiotiques chez les bactéries ……………………………………………………………...………………..31 II. 2.3.7 Le rôle des éléments transposables dans la dissémination des gènes de résistance aux antibiotiques ………………………………………………..32 PARTIE EXPERIMENTALE III.MATERIELS ET METHODES III.1. Objectif …………………………………………………………………34 III.2. Revivification des souches d’actinomycètes…………………..……..34 III.3. Vérification de la pureté des souches ………………………………..34 III.3.1 Macromorphologie et caractères culturaux …………………………..35 III.3.2 Micromorphologie ………………………………………………….....35 III.3.3 Etude physiologique et biochimique …………………………………36 III.3.3.1 Etude physiologique ………………...……………………………...36 III.3.3.1.1 Hydrolyse de l'amidon ……………………………………………36 III.3.3.1.2 Hydrolyse de la gélatine ………………………………..…………36 III.3.3.2 Etude biochimique …………………………………………………..36 III.3.3.2.1 Utilisation des différents substrats carbonés et production de l'H2S …………………………………………..…………………………………...36 III. 3.3.2.2 Utilisation du citrate comme source de carbone ……………………………………………………………………………….36 III.3.3.2.3 La recherche de catalase………..……………………………………37 III.3.3.2.4 La recherche de l'Uréase …………………………….…………….37 III.3.3.2.5 La recherche de la production d'indole ………………..………….37 III.4. Conservation des souches d’actinomycète ……….……..……………37 III.5. Recherche de l'activité antibactérienne …………………..……..…….38 III.5.1 Revivification et des bactéries testes ……………………….…………38 III.5.1.1 Tests de confirmation de l’identité et de la pureté des bactéries indicatrices ……………………………….………………………………..38 III.5.1.2 Préparation des inocula de bactéries-tests ………...……………….38 III.5.2 Confirmation de l’activité antibactérienne et sélection des souches actives : test des cylindres d’agar ……………………………………………………39 III.6. Production et extraction de métabolites secondaires………….……..39 III.6.1 Production et extraction de métabolites sur milieu solide……….……39III.6.2 Production et extraction de métabolites en milieu liquide……..……..39 III.6.3 Technique des disques ………………………..……………………….40 III.6.4 Détermination de la Concentration minimale inhibitrice (CMI) ……………………………………………………………………….40 III.7. Caractérisation de la molécule bioactive …………..………..............42 III.7.1 Chromatographie sur Couche mince (CCM)…………….…………….42 III.7.2 Bioautographie des molécules bioactives …………….……………….43 IV.RESULTATS ET DISCUSSION IV.1. Revivification et purification des isolats d’actinomycètes......................44 IV.2. Recherche de l'activité antibactérienne .………..…………………….46 IV.2.1 Purification et confirmation de l’identité des bactéries-tests……….….46 IV.2.2 Confirmation de l’activité antibactérienne et sélection des souches actives : Test des cylindres d’agar ………………………………………….……….47 IV.3. Identification des souches d'actinomycètes actives………..…………49 IV.3.1 Résultat de l’étude morphologique ……………………………………49 IV.3.1.2 Aspect microscopique ……….……………………………………….50 IV.3.2 Résultat de l’étude physiologique et biochimique …………………….50 IV.4. Production et extraction de métabolites secondaires..………….…...53 IV.4.1 Production de métabolites par fermentation sur milieu solide …….....53 IV.4.2 Production de métabolites par fermentation en milieu liquide ………54 IV.4.3 Résultats de l’activité antibactérienne des extraits métanolique (technique des disques)……………………………………………………………………...55 IV. 4.4 Détermination de la Concentration minimale inhibitrice (CMI)…....................................................................................................57 IV. 5. Caractérisation préliminaire de la substance antibactérienne sécrétée par la souche A4…………………………………………………......……..57 IV. 5.1 Résultat de la Chromatographie sur couche mince (CCM) (révélation chimique)………………………………………………………….………….57 IV.5.2 Résultats de la Bioautographie des molécules bioactives……………..59 V.CONCLUSION…………………………………………………..…………61 |
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