| Titre : | Caractéristique biochimique des métabolites bioactifs produits par des actinomycètes |
| Auteurs : | ISMAIL AZIZ, Auteur ; ZOUBEYDA HADJ SAYAH, Auteur ; ADLI DJALLAL EDDINE HOUARI, Directeur de thèse |
| Type de document : | texte imprimé |
| Editeur : | Université MOULAY TAHAR, Saida Faculté des Sciences Département de Biologie, 2017/2018 |
| Format : | 100 p / 29 CM |
| Accompagnement : | CD |
| Langues: | Français |
| Langues originales: | Français |
| Catégories : | |
| Mots-clés: | Actinomycètes ; Substances bioactive ; antimicrobiennes ; fermentation |
| Résumé : |
Les actinomycètes sont des bactéries responsables de la production de la plupart des
molécules bioactives. Les travaux d’isolement de ces microorganismes à partir des écosystèmes extrêmes comme les sols arides et semi-arides de l’Algérie sont rares. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés à la recherche des souches productrices de molécules antimicrobienne dans les sols des zones arides et d’optimiser les conditions de leur production. Parmi les deux milieux International Streptomyces project 2 (ISP2) et le milieu Gélose Yeast Malt (GYM) testés dans ces investigations, le milieu Gélose Yeast Malt (GYM) est le plus favorable pour la croissance des Actinomycètes. Le test de mise en évidence des activités antimicrobiennes, a révélé que cinq souches A18, A4, A30, A17 et A15 sont douées d’activités antibactériennes et antifongiques dont l’importance varie selon le milieu de culture et les souches employées, Ces molécules sont avérées, également, actives contre des bactéries Gram positif .L’activité antimicrobienne a été testée contre 4 bactéries pathogènes (Staphylococcus aureus ATCC 25923 Entirococcus feacalis ATCC0409P ,Pseudomonas aerogénosa ATCC27853 , Escherichia coli )et levure candida albicans ATCC2091 . Les résultats obtenus nous ont permis de sélectionner deux souches d’actinomycètes codées A4 et A18 qui ont une activité antibactérienne. Enfin, Ces souches ont été cultivées par fermentation sur milieu solide Actinomycète fermentation (AF) afin de produire des extraits riches en métabolites secondaires. L’extrait méthanolique était actif contre les cinq bactéries pathogènes testées (S ,aureus ,B,sebtillus , B,cer ,K,pneumeuniae P,aeroginosa). nous a permis de constater que ces substances ont un effet antibactérien efficace. |
| Note de contenu : |
Introduction………………………………………………………………………………….. 1
Chapitre I I.1Historique………...…………………………………………………………..…………….4 I.2. Définition…………...………………………………………………………..……………4 I.3.Caractères généraux…………………………………………………………..…………..5 I.3.1.Morphologie…………………………………….………………………….……………5 I.3.2. Physiologie ………………………………………….…………………………..………6 a) Le taux d’humidité…………………………………..………………………….…………6 b) La température……………………………………………………………………………6 c) pH…………………………………………………………………………………………..7 d) Reports avec l’oxygène ……………………………………………….…………………7 e) Tolérance en NaCl …………………………………………...……………………………7 f) Matière organique …………………………………………………………………………8 I.3.3. Caractères chimio taxonomiques……………………………………………………...8 I.3.3.1. Acides aminés de la paroi………………….……………………..………………..…8 I.3.3.2. Glucides ……………………………………..………………………….…………….8 I.3.3.3. Acides gras ……………………………………...……………………………………8 I.3.3.4. Acides nucléiques ………………………………..…………………………………...9 I.4. Classification des actinomycètes……...……………...………………….………………9 I.4.1. Genres et espèces de l’ordre Actinomycetales………………….…………..……….10 I.4.1.1. Caractères morphologiques………………………………………………...…… ..10 I.5. Ecologie et distribution dans la nature………………………….........................…..…11 I.5.1. Sols………………………………………………………………………...…...………11 I.5.2. Milieux marins…………………………………………………..………………….…12 I.5.4. Eaux douces …………………………………………………….……………….……12 I.5.5. Air ………………………………………………………………….………………….12 I.5.4. Les compost ……………………………………………………………………..……12 I.6. Importance des actinomycètes……………………………………………...………… 13 I.7.Cycle de développement des actinomycètes……………………………………...…… 13 Chapitre 2 II.1. Substances bioactives produites par les actinomycètes……………………………..15 II.1.1.Antibiotiques …………………………………………………… ………………….15 II.1.1.1. Historique ……………………………………………………………………..….15 II.1.1.2.Définition des antibiotiques ………………………………………………… …..15 II.1.1.3.Classification des antibiotiques…………………………………………………. 16 II.1.1.3.1.Familles des β-lactamines…………………………………………….……….. 16 a)Les pénicillines …………………………………………………………………...…... .17 b)Les céphalosporines …………………………………...……..…………………….… 17 c) Les aminosides………………………………………………………………………… 18 d) Les phénicols …………………………………….…………… ……………………18 e) Les tétracyclines …………………………………………………………………… 19 f) Les macrolides ……………………………………………..………………………19 g) Les quinolones ………………………………….. .……………………………….. 19 h) Les polypeptides …………...…………………………………………………….…20 II.1.1.2. Mode d’action des antibiotiques ……………………………… ………………20 II.1.1.2.1. Action sur la paroi bactérienne……………………………………………… 20 II.1.1.2.2. Action sur la membrane cellulaire ………………………………………...…21 II.1.1.2.3. Action sur des ribosomes……………………………… ……………………..21 II.1.1.2.4. Action sur la biosynthèse des acides nucléiques …………………………… 21 II.1.2. Technique de production et d’identification des antibiotiques II.1.2.1. Métabolites des actinomycètes ……………………………………………….. 21 II.1.2.1.1. Métabolisme primaire……………………………………….. ……………...22 II.1.2.1.2. métabolisme secondaire …………………………………..………………… 22 II.1.2.2. Effet de la composition du milieu de culture …………………… …………...22 II.1.2.3.Extraction des antibiotiques …………………………………... ……………...23 II.1.2.2.1. Extraction aux solvants organiques………………………… ……………..23 II.1.2.4. Production d’antibiotiques chez les actionomycétes ……….…… …………23 II.1.3.Enzymes …………………………………………………….…………………... 24 II.1.4. Les antifongiques ……………………………………………………………….24 Matériel et Méthodes Objectifs………………………………………………………………………………. .27 III.1.Revivification, purification et sélection des isolats d’actinomycètes productrice d’antibiotique III.1.1 Revivification des isolats ………………….………………… ………………28 III.1.2 Vérification de la pureté des souches………………………… …………….28 III.1.3 .Conservation des souches d’actinomycètes …………………. ……………28 III.1.3.1 conservations à court terme …………………………………………….. .28 III.1.3.2 Conservation à long terme ……………………………… ………………28 III.2Caractérisation morphologique III.2.1 Micromorphologie ………………………………………... ……………….29 III.2.2 Cratérisation biochimique III.2.2.1 Recherches de la catalase ……………………………….. ………….…29 III.3 Choix de milieu de culture……………………………… …………………..29 III.4 Purification et Confirmation de l’identité des souches ciblent …………...30 III.5 Purification ……………………………… ……………………….................30 III.6 Confirmation de l’identité des souches a-Confirmation macroscopique ….……………… ……………….………….30 b-Confirmation microscopique ….……………… ………………………….30 III.7. L’activité antimicrobienne ….……………… …………..………………..31 III. 7.1 Préparation de l’inoculum….……………… …………………………...31 III.8 Criblage primaire par la technique des cylindres agar …………………31 III.9 Préparation de l’inoculum des souches pathogènes …………………….31 III.10 Micromorphologie des souches pathogènes ……………………...........32 III.11 Production du métabolite secondaire III.11.1 Fermentation sur milieu solide…………………………………….…32 III.12 Extraction des métabolites III.12.1 Extraction des métabolites de fermentation sur milieu solide ………..32 III.12.2 Concentration des métabolites par utilisation d’un évaporateur rotatif (rotavapeur) …………………………………………………………………………….34 III.13 Tests de l’activité antibactérienne des extraits ………………………..…35 III.14 caractérisation préliminaire de l’agent antifongique par CCM ………..35 III.14.a –principe……………………………………………………………….….35 III.14 .b- Préparation de la plaque ……………………………………………...36 III.14 .c- Saturation de la cuve ……………………………...……………………36 III.14 -d Mode opératoire …………………...…………………………………….37 III.14 .e -Développement du chromatogramme …………………...……………..37 III.15 Anti biographie et choix de solvant d’extraction ………..………………..37 III.15 .1-Méthode des puits …………………...………………………………..…37 III.15.2-Révélation microbiologique des chromatogrammes (bio autographie)..38 III.16-Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI) sur microplaque………………………………………………………………………....39 III.16.1- Détermination des concentrations minimales bactéricides (CMB)……40 III.17-Electrophorèse des extrait…………………………………………………..41 III.17.1-La préparation de gel de séparation……………………………………..41 IV .Résultats et interprétation IV.1. Diversité morphologique des actinomycètes ……………………………...43 IV.2.Coloration de gram …………………………………………………………44 IV.3.Cratérisation biochimique IV.3.1-Recherches de catalase …………………………………..……………….....45 IV.4. Résultats de l’activité antimicrobienne ………………………………….....45 IV.5-Test de l’activité antibactérienne de l’extrait méthanolique des Actinomycètes IV.5.1-Aspect des souches bactériennes indicatrices …………………………….49 IV.6. inhibition des souches pathogènes par les actinomycètes………………….51 IV.7-Extraction des métabolites secondaires ……..…………...………………..53 IV.7.1-Evaluation de l’effet des extraits……………….…………………………54 IV.8.Résultats de la détermination le diamètre des zones d'inhibition des souches pathogènes en fonction de la concentration…………………………………….55 IV.9-Chromatographie sur couche mince en gel de silice…………………..….59 IV.10.a. Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI)……..62 IV.10.b-Détermination de la concentration minimale bactéricide (CMB) …...63 IV.10 .Résultats de technique d’électrophorèse…………………………………64 Discussion …………………………………………………………………………65 Conclusion général………………………………………………………………..70. Référence bibliographique……………………………………………………….72 Annexe…………………………………………………………………………....77 |
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