| Titre : | Recherche et caractérisation des substances antifongiques et antioxydants chez les actinomycètes du sols arides |
| Auteurs : | Habiba BELGACEM, Auteur ; Amel BENZERGA, Auteur ; Mokhtar Benreguieg, Directeur de thèse |
| Type de document : | texte imprimé |
| Editeur : | Université MOULAY TAHAR, Saida Faculté des Sciences Département de Biologie, 2017/2018 |
| Format : | 136 p / 29 CM |
| Accompagnement : | CD |
| Langues: | Français |
| Langues originales: | Français |
| Catégories : | |
| Mots-clés: | Actinomycète ; molécules bioactives ; activité antifongique ; activité antioxydant ; CCM |
| Résumé : |
Les actinomycètes sont des bactéries filamenteuses à Gram positif considéré comme les
meilleurs candidats pour la production des métabolites secondaires biologiquement actifs. Notre travail a pour but la mise en évidence de l’activité antifongique et antioxydant ainsi que la purification et la caractérisation de la substance impliquée dans ce phénomène chez des actinomycètes isolés à partir du sol aride algérien. Dix huit isolats ont fait l’objet de cette étude. Les tests d’antagonismes sont réalisés par la technique des cylindres d’agar envers deux bacteries à gram positif Staphylococcus aureus et Listeria monocytogenes et 5 champignons qui sont connues par leur importance dans les pathologies infectieuses humaines. 14 isolats ont montré un pouvoir inhibiteur contre les deux bactéries et 15 isolats ont montré une activité antifongique contre les 5 espèces fongiques :Fusarium graminearum, Aspergillus flavus, Aspergillus ochraceus, Pinicillium expansum, Aspergillus parasiticu en utilisant la technique de cylindre d’agar. Les résultats obtenus nous ont permis de sélectionner deux souches d’actinomycètes codées A10 et A7 qui ont un pouvoir inhibiteur très impotant, ces deux isolats actives sont utilisés pour une fermentation sur milieu solide (AF) (pour une production de la substance bioactive). Après 14 jours d’incubation à 28°C, le méthanol est utilisé pour l’extraction des métabolites produit dans le milieu. Les différents types des extraits bruts sont testés par la technique de contact direct contre 5 espèces fongiques. L’extrait méthanolique était actif contre les 5 souches cibles même à des faibles concentrations de l’ordre de 2mg/ml. Le test de dégradation de l’ergostérol a montré que la souche A7 produit une substance antifongique capable d’altérer les stérols membranaires, par contre, la souche A10 n’a donné aucun effet néfaste. Une caractérisation de l’agent inhibiteur en utilisant des techniques chromatographiques a été réalisée La séparation par CCM nous a permet de choisir parmi les 6 systèmes solvant utilisé le mélange Toluène - acide acètique(8 :2),et le Déchlorométhane –méthanol (8,2) comme étant les meilleurs dans la séparation. L’activité antioxydant des deux extraits bruts a été évalué à travers le piégeage des radicaux DPPH. Pour le premier test les pourcentages d’inhibition a été estimé à 47% et 58% pour A7 et A10 respectivement. Le test IC50 a été estimé à 14,88 pour l’extrait brut A7 et 8,10 pour l’exrait brut A10 Respectivement. |
| Note de contenu : |
Introduction générale.................................................................................................................. 1
Chapitre I : Généralités sur les actionomycetes I. Généralités sur les actinomycetes ....................................................................................... 4 I.1. Definition et caracteristiques............................................................................................ 4 I.2. Historique: ....................................................................................................................... 5 I.3. Ecologie .............................................................................................................................. 6 I.4. Taxonomie et critères de classification: ............................................................................. 8 I.4.1. Taxonomie des actinomycètes......................................................................................... 8 1.4.2 Classification..................................................................................................................... 8 1.5 Physiologie de développement................................................................................................... 10 1.5.2 L’oxygène: ..............................................................................................................................10 1.5.3 Le pH: ..................................................................................................................................... 10 1.5.4 La temperature........................................................................................................................... 10 1.5.5 L’activité de l’eau (Aw): .............................................................................................. 10 1.5.6 Tolérance en Na Cl........................................................................................................ 10 1.6 Cycle de développement ................................................................................................ 11 I.6.1. Mycélium primaire: ..................................................................................................... 11 I.6.2. Mycélium secondaire: ................................................................................................. 12 I.6.3. Types de spores: .......................................................................................................... 12 1.6.3.1 Les exospores............................................................................................................... 13 1.6.3.2 Les endospores............................................................................................................. 13 I.7. Morphologie: .................................................................................................................... 14 I.8. Importance: ...................................................................................................................... 15 1.8.1 Domaine médical et pharmaceutique .............................................................................. 15 1.8.2 Domaine agronomique .................................................................................................... 15 I.9. La production d'antibiotiques: .......................................................................................... 16 1.10 La production d’antifongiques ......................................................................................... 17 Chapitre II : Antifongique et antioxdant II. Antifongique et antioxydant : ............................................................................................. 19 II.1. Les Mycoses : .............................................................................................................. 19 II.1.1. Principaux agents des mycoses : ............................................................................. 19 II.1.2 Pathologies mycosiques les plus fréquentes .................................................................. 21 II.1.3 Antifongiques disponibles utilisés contre les mycoses .................................................. 24 II.2. Les antifongiques : .................................................................................................... 26 II.2.1. Définition ................................................................................................................... 26 II.2.2. Historique : .................................................................................................................. 26 II.2.3. Principaux antifongiques naturels utilisés en médecine humaine : ........................ 27 II.2.3.1. Griséofulvine ............................................................................................................. 27 II.2.3.2 Nystatine...................................................................................................................... 28 II.2.3.3. Autres agents polyènes antifongiques : ................................................................ 29 II.2.4 Les antifongiques allylamines ....................................................................................... 30 II.2.4.1 Le chlormidazole ......................................................................................................... 30 II.2.4.2 Le tolnaftate................................................................................................................. 30 II2.4.3 La fluorocytosine.......................................................................................................... 31 II.2.3.4. Les imidazoles............................................................................................................ 31 II.2.4.5. Les antifongiques allylamines : .............................................................................. 33 II.2.4.6 Les antifongique non classés ...................................................................................... 35 II.2.5 Nouveaux antifongiques d’origine naturelle ................................................................. 35 II.2.5.1 Echinochandines ......................................................................................................... 35 II.2.5.3 Nikkomycines.............................................................................................................. 35 II.2.5.4 Pradimicines : ....................................................................................................................... 36 II.2.6 Modes d’action des principaux antifongiques utilisés en thérapeutiques ...................... 36 II.2.7 Mécanismes de résistance aux principaux antifongiques .............................................. 39 II.2.8 Techniques d’étude et de caractérisation d’un antifongique : ...................................... 44 II.2.8.1. Extraction des antifongiques ................................................................................ 44 II.2.8.2 Purification des antifongiques .................................................................................... 45 II.2.8.3.Identification des molécules par des méthodes spectrales : ...................................... 45 II.3. Activite antioxydant : .................................................................................................. 46 II.3.1. Le potentiel antioxidant ................................................................................................ 46 II.3.2 Les radicaux libres.......................................................................................................... 46 II.3.3. Origine des radicaux libres........................................................................................... 47 II.3.4. Cibles des radicaux libres: ........................................................................................... 49 II.3.5 Le stress oxydatif............................................................................................................ 50 II.3.6 Les antioxydants............................................................................................................. 50 II.3.6.1 Les antioxydants endogens.......................................................................................... 50 II.3.6.2 Les antioxydants exogènes.......................................................................................... 50 II.3.7 Les Antioxydants chez les actiobacéries ........................................................................ 52 Partie Experimentale Chapitre III : Matériels et méthodes III.Matérils et méthode ............................................................................................................ 55 III.1 Objectif............................................................................................................................. 55 III.2. Criblage des souches actinomycètales : ......................................................................... 56 III.2.1Origine des souches ....................................................................................................... 56 III.2.2. Revivification des souches .......................................................................................... 56 III.2.3. Confirmation de l’identité des souches d’actinomycètes............................................. 56 III.3. Etude morphologique : ................................................................................................... 56 III.3.1. Les caractères culturaux et morphologiques ............................................................... 56 III.3.2. Etude micro morphologique : ...................................................................................... 57 III.3.2.1. Observation au faible Grossissement : ..................................................................... 57 III.4.1. Etude de l’activité antibactérienne : ............................................................................ 59 III.4.1.1. Préparation des inocula de bactéries-tests : .............................................................. 59 III.4.1.2. Technique des disques d’agar (Tortorano et al, 1979) : ........................................... 59 III.4.1.3. Lecture : .................................................................................................................... 59 III.5.2. Etude de l’activité antifongique : ................................................................................ 60 III.5.2.1. Préparation des suspensions fongiques : .................................................................. 60 III.5.2.2. Mise en évidence des activités antifongiques ........................................................... 60 III.5.2.3. Lecture ...................................................................................................................... 61 III.6. Production du métabolite secondaire: ............................................................................ 61 III.6.1.Fermentation sur milieu solide: .................................................................................... 61 III.7.Extraction des metabolites: ............................................................................................. 61 III.7.1. Extraction des métabolites de fermentation sur milieu solide ..................................... 61 III.8. Tests de l’activité antifongique des extraits ................................................................... 63 III.9. Etude de l’action de l’ergostérol sur l’activité antifongique : ........................................ 64 III.10. caractérisation préliminaire de l’agent antifongique par CCM : .................................. 64 III.10.1. Principe : ................................................................................................................... 64 III.10.2. Préparation de la plaque ............................................................................................ 65 III.12. La semi-purification des fractions séparées par CCM : ............................................... 67 III.13. Contrôle de l’activité de chaque composant séparé ..................................................... 68 III.14. Etude de l’activité antioxydant : .................................................................................. 68 Chapitre IV : Résultat et discussion IV .Résultat et discussion ....................................................................................................... 73 IV .1 .Rèsultat de Rèvivification des souches d’actinomycètes ............................................. 73 IV.2. caractéristiques macroscopiques des isolats .................................................................. 73 VI. 3. Resultats de l’activite antibacterienne ........................................................................... 75 IV.4.Caractérisation morphologique ........................................................................................ 79 IV.4.1. Macromorphologie et caractères culturaux.................................................................. 79 VI.4.2. Coloration de gram ...................................................................................................... 80 V. Tests de l’activité antifongique des extraits........................................................................ 86 V.1 Technique de contact directe ou de dilution...................................................................... 86 V.2 Etude de l’action de l’ergostérol sur l’activité antifongique ............................................. 90 v.2.1 Résultat de la bioautographie : ....................................................................................... 95 v.2.2 Purification des molécules bioactives ............................................................................ 96 V..4 Piégeage du radical libre DPPH ....................................................................................... 97 V.3.Les IC 50 sur le radicale DPPH....................................................................................... 100 Conclusion ............................................................................................................................. 103 Référence bibliographique .................................................................................................... 106 Annexe ................................................................................................................................... 112 |
Exemplaires
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