| Titre : | Contribution à l’étude des activités biologiques de quelques extraits de Citrullus colocynthis de région d’El Bayadh et de Béchar |
| Auteurs : | Nadjat Rahmani, Auteur ; Fatma Zohra Touati, Auteur ; Nadjat Rahmani, Auteur ; Halla Noureddine, Directeur de thèse |
| Type de document : | texte imprimé |
| Editeur : | Dr. Moulay Tahar Université Saida, Faculté des Sciences Naturelles et de la Vie, 2015/2016 |
| Format : | 147 p / 29 CM |
| Accompagnement : | CD |
| Langues: | Français |
| Langues originales: | Français |
| Mots-clés: | Biologie ; Citrullus colocynthis ; Extrait méthanolique ; tests phytochimique ; dosage des polyphénols ; Activité antibactérienne ; antifongique ; Activité antioxydante chromatographie sur couche mince ; Cytotoxicité. |
| Résumé : |
Ce travail porte sur l’étude in vitro de de la phytochimie et des activités antioxydantes,
antifongique et antibactérienne des extraits qu’étant isolées à partir de la plante médicinale de la flore du Sahara algérienne (la région de Bechar et de l’Abiodh sidi cheikh) : Citrullus colocynthis (L.) Schard, une plante aromatique importante et largement utilisé dans la médecine traditionnelle. Les extraits du Citrullus colocynthis des deux régions ont été effectués comme suit : extrait hydro- méthanolique (EM) des fruits par macération par un rendement de 11.3 % pour la région du El Abiodh Sidi Cheik (32) et de 10.75 % pour la région de Béchar (08) et décoction par une rendement de 19.96 % (32) , et 22.86% (08) ; hexanique : 15.7% (32) et 16.1% (08) ; l’extrait d’acétate d’éthyle : 10% (32) et 13% (08) . Les tests phytochimiques et des dosages en polyphénols totaux ont permis de détecter la présence des alcaloïdes, substances polyphénoliques (flavonoïdes, tanins, anthocyanes), quinones, coumarines, stérols et triterpènes, et les composés réducteurs. Aussi, la séparation des extraits par chromatographie sur couche mince des extraits montre qu’ils contiennent des différentes classes des alcaloïdes, et présentent certains flavonoïdes. Les extraits méthanoliques de la C. colocynthis est majoritairement composés des stérols et des triterpènes. Les activités biologiques étudiées consistent : une détermination des CMI sur milieu liquide de l’EM de deux régions vis-à-vis 14 souches bactériennes de références. Les CMI obtenues vis-à- vis des bactéries testées sont comprises entre 3.25 et 208 mg/ml. Les résultats obtenus indiquent que B. cereus qu’était la plus sensible parmi nos souches testées avec une valeur égale à 3.25 mg/ml pour l’EM (32) et de EM (08) . Par contre, C. fetus, E. coli, K.pneumoniae sont les plus résistantes vis-à-vis l’extrait EM (32) et pour l’extrait de EM (08) C. fetus, E. coli, C. freundii représentent les souches les plus résistantes parmi les souches testées. L’effet antifongique des EM (32) montre qu’Aspergillus flavus et F. oxysporum ont été les plus sensibles vis-à-vis l’extrait et la souche la plus résistance est R.stolonifer. Cependant, pour l’EM (08) la souche F.oxysporum est la souche la plus résistance. Les souches A. flavus et A.niger, A. ochraceus et R.stolonifer sont moyennement sensible à l’extrait. L’EM(32) a exercé un fort effet inhibiteur vis-à-vis : C.albicans IP444 et C.albicans 10231. Par contre, pour les mêmes concentrations EM (08) exerce un effet inhibiteur faible vis-à-vis : C.albicans IP444 et C.albicans 10231. La détermination des CMI sur milieu gélose des extrait qui a été rendu efficace vis-à-vis la croissance des souches de moisissures testées (pour les EM de (08) et (32)) : Rhizopus stolonifer (53.85%),(61.54%), Aspergillus niger (32.50%),(30.77%), et Aspergillus flavus (46%),(60%) et F.oxysporum (46%),(46%) respectivement, à une concentration de (5mg/ml). L'étude de l'activité antioxydante des extraits, a montré un pouvoir de piégeage du radical libre DPPH avec une IC50 à une concentration de 0.98 mg/ml (EM 08 ) et de 1.1 mg/ml (EM 32 ). L’activité réductrice est proportionnelle avec l’augmentation des concentrations de l’extraits dans lesquelles les extraits méthanolique (32) et de (08) testés possèdent une capacité dose dépendante à réduire le fer. L’essai de la cytotoxicité de l’EM (32) et (08) vis-à-vis les globules rouges présentent un effet cytotoxique, les extraits testés ont montré une forte activité hémolytique avec des pourcentages supérieurs à 4 % Donc, ils ont d’une très forte toxicité |
| Note de contenu : |
INTRODUCTION GENERALE………………………………………………………...1
PARTIE I : Synthèse Bibliographique Chapitre I: Généralité sur les métabolites secondaires I. Présentation générales des métabolites secondaire…………………………………......06 I.1.Définition ……………………………………………………………………………..06 II. Classification des métabolites secondaires …………………………………………….07 II.1. Les composés phénoliques …………………………………………………………..II.1.1. Définition ………………………………………………………………………….. II.1.2. Structure chimique …………………………………………………………………07 07 07 II.1.3. Biosynthèse des polyphénols ………………………………………………………08 1. La voie de l’acide shikimique…………………………………………………………...08 2. La voie de l’acétate……………………………………………………………………...II.2. Classification des polyphénols ………………………………………………………. II.2.1. Les acides phénoliques …………………………………………………………......08 09 09 II.2.1.1. Acides hydroxycinamiques ………………………………………………………10 II.2.1.2. Acide hydroxybenzoïques ……………………………………………………......11 II.2.2. Les flavonoïdes…………………………………………………………………….II.2.2.1. Structure des flavonoïdes………………………………………………………... II.2.3. Les lignanes ……………………………………………………………………….11 11 12 II.2.4. Les coumarines …………………………………………………………………….14 1. Définition……………………………………………………………………………….14 2. Classification des coumarines…………………………………………………………..14 3. Toxicité des coumarines ……………………………………………………………….II .2.5. Les tannins………………………………………………………………………… 1. Classification …………………………………………………………………………..16 16 16 2. Effets bénéfiques des tannins …………………………………………………………..16II.3. Les alcaloïdes ……………………………………………………………………… 1. Définition ………………………………………………………………………………. 2. Propriétés des alcaloïdes………………………………………………………………...17 17 17 3. Structure des alcaloïdes ………………………………………………………………...17 3.1. Les alcaloïdes vrais……………………………………………………………………18 3.2. Les pseudo-alcaloïdes………………………………………………………………...18 3.3. Les proto-alcaloïdes …………………………………………………………………..18 4. la biosynthèse des alcaloïdes …………………………………………………………...18 5. Le Rôle des alcaloïdes…………………………………………………………………..5.1. Effet pharmacologique ……………………………………………………………….. 5.2. Effet sur la plante ……………………………………………………………………..18 18 19 II.4. Les terpenoïdes ………………………………………………………………………19 1. Définition ……………………………………………………………………………….19 2. Structure des terpenoïdes ……………………………………………………………….19 3. Classification des terpenoïdes ………………………………………………………….20 Chapitre II : Présentation de la plantes étudiée I-Ethnopharmacologie et ethnobotanique …………………………………………………25 I.1. Noms vernaculaires……………………………………………………………………26 I.2.Taxonomie ……………………………………………………………………………..27 I.3. Description morphologique……………………………………………………………28 I.4. Répartition géographique ……………………………………………………………..30 5. Actions thérapeutiques………………………………………………………………….31 I.6. Utilisation populaire…………………………………………………………………...34 I.7.Toxicité…………………………………………………………………………………35 I.8. Composition chimique (Composition en métabolites secondaires des différentes parties de la coloquinte (Citrullus colocynthis)…………………………………………… I.8.1. La pulpe……………………………………………………………………………... 36 36 I.8.2 . L es graines ………………………………………………………………………...37 I.8.3. Les tiges, les feuilles et les fleurs …………………………………………………...38 I.8.4. les racines ……………………………………………………………………………39 Chapitre III : Les activités biologies I. Activité antioxydante……………………………………………………………………42 I.1. Généralités……………………………………………………………………………..42 I.2. Mécanismes de l’oxydation …………………………………………………………...43 44 I.3. Mécanismes d’action des antioxydants………………………………………………..II. Activité antimicrobienne……………………………………………………………….. II.1.1.1. Mécanismes génétiques ………………………………………………………..... II.1.1.2. Mécanismes biochimiques……………………………………………………….44 44 45 45 45 II.1.2. Site D’action des métabolites secondaires ………………………………………….46 II.2. L’activité antifongique ……………………………………………………………….46 II.3. L’activité antiparasitaire ……………………………………………………………48 II.1. L’activité antibactérienne……………………………………………………………. II.1.1 Mécanismes d’action et de résistance des agents antimicrobiens ………………….. PARTIE II: Matériel Et Méthodes I. Objectif …………………………………………………………………………….. I. Enquête ethno pharmacologique………………………………………………………...52 52 II.1. Description de la zone d'étude ……………………………………………………….52 53 54 II.2. Questionnaire ………………………………………………………………………... III. Matériel végétal ………………………………………………………………………. III .1. Situation géographique de la zone de récolte ……………………............................ III.3. Récolte et séchage…………………………………………………………………… IV. Les extractions ………………………………………………………………………... IV.1 Préparation des extraits ……………………………………………………………… 54 55 56 56 IV.1.1 Extraction par macération hydro-methanolique …………………………………...57 IV.1.2. Décoction de l'extrait hydro-méthanolique………………………………………..57 IV.1.3. Décoction en présence d’acétate d’éthyle ………………………………………...58 IV.1.4. Décoction en présence de hexane………………………………………………….58 IV.2. Détermination du rendement des extraits secs ……………………………………...61 V. Les analyses qualitatives ……………………………………………………………….62 V.1. Tests phytochimiques (Screening phytochimique )………………………………….62 V.2. Chromatographie sur couche mince …………………………………………………. V.2.1. Principe de la méthode ………………………………………………………….......66 66 VI. les Analyses quantitatives ……………………………………………………………..VII. Évaluation des activités biologiques des extraits bruts ……………………………… 1. Matériel biologie ……………………………………………………………………….67 67 67 69 69 1.1. Microorganismes……………………………………………………………………..69 1.2. Globule rouge…………………………………………………………………………69 2. Méthode ………………………………………………………………………………...69 2.1. L’activité antimicrobienne de la C, colocynthis……………………………………………69 VI.1.Dosage des composés phénoliques ………………………………………………….. 1. Détermination de la teneur des Polyphénols totaux……………………………………..2.1.1 Préparation des solutions des extraits………………………………………………..69 2.1.2. Préparation de l’inoculum ………………………………………………………….70 a. Préparation de pré-culture………………………………………………………………70 b. Préparation de la suspension microbienne………………………………………………71 2.1.3. Détermination des concentrations minimales inhibitrices (CMI) par la méthode des micro-dilutions sur milieu liquide…………………………………………………………72 2.1.3.1. Activité antibactérienne…………………………………………………………... 2.1.3.2. Activité antifongique………………………………………………………….......74 2.1.3.2.1. Le principe ……………………………………………………………………...74 2.1.3.2.2. Mode opératoire ………………………………………………………………...74 2.1.4. Détermination des concentrations minimales inhibitrices (CMI) par la méthode Des micro-dilutions sur milieu solide …………………………………………………….. 2.1.4.1. Croissance radiale sur milieu solide ……………………………………………... 72 76 76 2.1.4.1.1. méthode direct ………………………………………………………………….76 2.1.2. Détermination des concentrations minimales inhibitrice…………………………...79 3 . L’activité anti oxydante ………………………………………………………………..3.1.1.1. Mode opératoire ………………………………………………………………….. 3.1.1.2. Détermination IC50 ……………………………………………………………… 3.1.1.3. Détermination l'activité anti radicalaire…………………………………………...79 79 80 81 83 83 3.1.2. Pouvoir réducteur du fer ……………………………………………………………83 4. Étude de la cytotoxicité d’extrait vis-à-vis des érythrocytes ……………………………84 4.1. Préparation de la suspension érythrocytaire……………………………………………84 84 3. 1. Méthodes de détermination de l’activité antioxydante ……………………………… 3.1.1. Piégeage du radical DPPH …………………………………………………………. 4.2. Évaluation de la cytotoxicité extrait …………………………………………………. PARTIE III : Résultats et Discussion I. Enquête ethno pharmacologique ………………………………………………………..87 II. Extractions ……………………………………………………………………………..89 II.1. Rendements des extraits bruts obtenus ………………………………………………89 III. Screening phytochimiques …………………………………………………………….91 IV. Analyse chromatographique sur couche mince………………………………………..97 V. Dosage des composés phénoliques …………………………………………………….100 V.1. Courbe d’étalonnage pour le dosage des polyphénols totaux ………………………..100 VI. Étude des activités biologiques des extraits bruts …………………………………….102 VI.1. Évaluation de l’activité antimicrobienne…………………………………………….102VI.1.1. détermination des concentrations minimales inhibitrices (CMI) par la méthode Des micro-dilutions sur milieu liquide……………………………………………………. 102 VI.1.1.1. Activité antibactérienne…………………………………………………………. VI.1.1.2. Activité antifongique…………………………………………………………….102 VI.1.1.2.1. Les levures……………………………………………………………………..106 107 VI.1.1.2.2. Les moisissures ……………………………………………………………….. VI.1.2. Détermination des concentrations minimales inhibitrices (CMI) par la méthode des micro-dilutions par méthode direct sur milieu solide ………………………….... ….. 106 108 VI.3. Évaluation du potentiel antioxydant des extraits ……………………………………113 VI.3.1. Piégeage du radical 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyl (DPPH•) …………………….113 1. Courbe d’étalonnage…………………………………………………………………….115 VI.3.2. Pouvoir réducteur du fer ……………………………………………………….....117 VII. Tests d’hémolyse in vitro……………………………………………………………………..118 CONCLUSION GENERALE……………………………………………………………123 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES………………………………………………126 ANNEXE………………………………………………………………………………….143 |
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